Principe du marquage⚓
Une redistribution des lipides de la membrane plasmique se produit lors de l'apoptose avec notamment la translocation des phosphatidylsérines (PS) du feuillet interne vers le feuillet externe. L'annexine-V est une protéine ayant une forte affinité pour les PS. Conjuguée à un fluorochrome comme le FITC (Isothiocyanate de fluorescéine), l'annexine-V permet de marquer les PS extracellulaires des cellules en apoptose. On utilise habituellement conjointement avec l'annexine-V un colorant fluorescent de l'ADN, très souvent l'iodure de propidium (IP ou PI en anglais).
Remarques :
l'annexine V et l'IP ne traversent pas la membrane des cellules intactes
lors des phases tardives de l'apoptose, la membrane n'est plus intacte ; les caractères de la cellules s'apparentent à ceux d'une cellules nécrosée
Résultat attendu du double marquage
Analyse de cytogrammes⚓
Le document ci-dessous présente des résultats typiques de cellules subissant l'apoptose et d'autres la nécrose à différents temps.
Cellules en apoptose⚓
On s'intéresse à l'évolution du marquage au cours de l'apoptose.
Cytogramme A
Cytogramme B
Cytogramme C
Cellules en nécrose⚓
On s'intéresse à l'évolution du marquage au cours de l'apoptose.
Cytogramme D
Cytogramme E
Cytogramme F
Comparaison apoptose / nécrose⚓
On remarque donc que les cellules passent directement du stade "normal" au stade "membrane altérée".