Dénaturation thermique de l'ADN

On chauffe des solutions d'ADN A et B différents mais de même taille (647 pb) et on mesure leur absorbance à 260 nm en fonction de l'élévation de température. Les résultats sont présentés ci-dessous :

Analyse à 40 °C

Expliquer la différence d'absorbance observée à 40°C.

Choix attendu

l'ADN B est dénaturé
l'ADN A est plus concentré que l'ADN B
l'ADN B est plus concentré que l'ADN A

L'absorbance à 260 nm dépend de la quantité d'ADN dans le milieu. A 40°C, l'ADN n'est pas dénaturé. La concentration en ADN B est donc supérieure à la concentration en ADN A (comme les 2 molécules ont la même taille, le nombre de molécules d'ADN B est supérieur au nombre de molécules d'ADN A).

Correction Recommencer

Température de fusion de l'ADN A

Déterminer graphiquement la température de fusion de l'ADN A

On utilise la méthode des tangentes pour déterminer les Tm :

on trace les tangentes aux points d'inflexion de la courbe
on trace la perpendiculaire à ces tangentes telle que la courbe de dénaturation la coupe en son milieu
on regarde alors la température correspondante

On trouve TmA ≈ 67°C

Correction Recommencer

Température de fusion de l'ADN B

Déterminer graphiquement la température de fusion de l'ADN B

On utilise la méthode des tangentes pour déterminer les Tm :

on trace les tangentes aux points d'inflexion de la courbe
on trace la perpendiculaire à ces tangentes telle que la courbe de dénaturation la coupe en son milieu
on regarde alors la température correspondante

On trouve TmB ≈ 92°C

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Différences ?

Expliquer les différences observées

Choix attendu

L'ADN B est plus concentré que l'ADN A
Non, la concentration n'a aucune incidence sur la Tm
L'ADN B est plus long que l'ADN A
Non, tous les 2 font 647 pb
L'ADN A est plus long que l'ADN B
Non, tous les 2 font 647 pb
l'ADN B est plus riche en GC que l'ADN A
Les appariements GC sont plus difficiles à rompre que les appariements AT car ils sont maintenus par 3 liaisons H. Par conséquent il faut chauffer plus pour les dénaturer.
l'ADN A est plus riche en GC que l'ADN B

On a TmB > TmA.

La Tm dépend de la longueur des brins et de la teneur en G-C. Ici les brins font la même taille. La différence ne peut s'expliquer que par la teneur en G-C. Le pourcentage de G-C est plus élevé dans l'ADN B que dans l'ADN A.

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Analyse à 40 °C

Votre choixChoix attenduRéponse

Température de fusion de l'ADN A

Température de fusion de l'ADN B

Différences ?

Votre choixChoix attenduRéponse

Choix attendu

Choix attendu