Un fragment nucléotidique A est digéré par une enzyme de restriction : Hind III. La taille des produits de la digestion et du fragment A intact est déterminée par électrophorèse.
Pour cela, on prépare un gel d'agarose à 0,8% en tampon TBE 1X en présence de Gelgreen 10 000X
Un volume de 15 µL de la digestion et de la séquence A non digérée est mélangé à un tampon de charge 6X et les échantillons sont déposés dans les puits du gel.
La migration s'effectue pendant 1h15 à 80 V.
La procédure d'électrophorèse est indiquée ici :
Préparation du gel⚓
Masse d'agarose
Volume de Gelgreen
Volume de tampon
Résultats de l'électrophorèse⚓
Les résultats de l'électrophorégramme sont présentés ci-dessous :
Piste 1 : Marqueur de taille d'ADN
Piste 2 : Fragment A (1 bande)
Piste 3 : Fragment A digéré par Hind III (2 bandes)
Piste | 1 | 2 | 3 | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Taille des fragments (en pb) | 15500 | 9800 | 4000 | 3595 | 1450 | 290 | 160 | à déterminer | ||
Distance de migration (en mm) | 22 | 23 | 27 | 28 | 36 | 51 | 56 | 45 | 52 | 51 |
