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Mise en évidence expérimentale de la fonction de relecture


Titre de l'activité : Mise en évidence expérimentale de la fonction de relecture

Description de l'expérience⚓

Titre de l'activité : Description de l'expérience

On a synthétisé une matrice poly(dA) associée à l'amorce correspondante marquée à la thymidine tritiée (3H). Une cytidine « incorrecte » marquée au 32P est alors ajoutée à l'extrémité 3' de l'amorce.

Construction expérimentale pour la mise en évidence de la relecture

Le complexe matrice-amorce est ensuite incubé avec de l'ADN polymérase I purifiée.

Analyser ces résultats expérimentaux pour en déduire la ou les fonctions de l'ADN polymérase I mise en évidence.

En présence de thymidine non radioactive⚓

Titre de l'activité : En présence de thymidine non radioactive

En présence de thymidine triphosphate (dTTP) non radioactive, on observe rapidement une diminution de la radioactivité liée au 32P alors que la radioactivité 3H reste au niveau de la construction.

Analyse

Que traduit la diminution de la radioactivité liée au 32P ?

Votre choixChoix attenduRéponse

  • la cytidine radioactive a été éliminée

  • les thymidines radioactives ont été éliminées

  • il s'est passé beaucoup de temps, la radioactivité a diminué naturellement

Si on observe une perte de la radioactivité liée au 32P, c'est que la cytidine radioactive a été éliminée par l'ADN polymérase I.

CorrectionRecommencer

Interprétation

Que peut-on déduire de cette analyse ?

Votre choixChoix attenduRéponse

  • la cytidine est instable

  • l'ADN polymérase I possède une fonction exonucléase de 5' vers 3'

  • l'ADN polymérase I possède une fonction exonucléase de 3' vers 5'

La cytidine se trouvant à l'extrémité 3' de l'amorce, c'est que la polymérase possède une activité exonucléase 3'-5'.

CorrectionRecommencer

En absence de Thymidine⚓

Titre de l'activité : En absence de Thymidine

En absence de dTTP, il y a par contre perte à la fois de la radioactivité 32P et 3H.

Que traduit la diminution des deux types de radioactivité ?

Votre choixChoix attenduRéponse

  • la cytidine radioactive a été éliminée

  • les thymidines radioactives ont été éliminées

  • il s'est passé beaucoup de temps, la radioactivité a diminué naturellement

CorrectionRecommencer

Interprétation

Que peut-on déduire de cette analyse ?

Votre choixChoix attenduRéponse

  • l'ADN polymérase I ne se contente pas d'enlever le nucléotide mal apparié

  • L'ADN polymérase I se limite au nucléotide mal apparié si elle dispose de nucléotides pour poursuivre l'élongation

  • La réparation est un mécanisme aléatoire car la polymérase est incontrôlable

En présence de dTTP, elle incorpore la thymidine par complémentarité des bases grâce à sa fonction polymérase. En absence du nucléotide approprié, elle va non seulement éliminer la base mal appariée 32PpC mais également les bases correctes 3HpT.

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  • Description de l'expérience
  • En présence de thymidine non radioactive
    • En absence de Thymidine

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