Mise en évidence des télomères⚓
Tetrahymena thermophila, un protozoaire cilié, possède de nombreux minichromosomes (courtes séquences d'ADN linéaires).
Elizabeth Blacburn a montré par séquençage que les extrémités des minichromosomes sont constituées de 20 à 60 répétitions de la séquence CCCCAA (rDNA pour repeated DNA).
D'autre part, Jack Szostak a montré que les extrémités d'un plasmide linéaire introduit chez la levure se recombinaient avec l'ADN chromosomique et ne se maintenait pas tel quel dans la cellule.
En 1982, Blackburn et Szostak ont recréé des minichromosomes artificiels en liant un fragment de rDNA de Tetrahymena de 1,5 kb à chaque extrémité de plasmides de levure linéarisés contenant une origine de réplication. Ils ont ensuite introduit la construction chez la levure chez la levure.
Ils ont observé que les minichromosomes artificiels se maintenaient dans les cellules.
Analyse et interprétation
Mise en évidence de la télomérase⚓
Expérience de Greider⚓
En 1985, Afin d'étudier comment les télomères étaient synthétisés, Carol Greider a ajouté à un extrait acellulaire de Tretrahymena du dGTP radioactif et du dTTP non radioactif ainsi que différentes amorces :
(TTGGGG)4
télomère de levure
(CCCCAA)4
pBR322
Après un temps d'incubation suffisant, elle a déposé les différents mélanges sur gel de polyacrylamide et analysé la taille des fragments par autoradiographie. Elle a obtenu les résultats suivants :
Un extrait acellulaire correspond au contenu d'une cellule qui a été détruite.
Conditions pour une synthèse d'ADN
Objectif de l'expérience
Résultats positifs
Amorces utilisées
Interprétation (1)
Interprétation (2)
Expérience de Greider et Blackburn⚓
Greider et Blackburn ont ensuite montré que l'enzyme identifié était un complexe ribonucléoprotéique. En 1989, elles ont identifié un ARN contenant la séquence CAACCCCAA.
Elles ont rendu cette séquence indisponible et ont constaté que l'activité télomérase était abolie.
Interprétation de l'expérience
D'autre part, elles ont introduit des mutations dans la séquence de l'ARN. Après séquençage des télomères, elles ont retrouvé les altérations au niveau de leur séquence.