On souhaite cloner le gène de la luciférase dans un vecteur d'expression afin de pouvoir purifier l'enzyme facilement.
Pour cela, on dispose
du plasmide pGEM-luc qui contient le gène de la luciférase
Carte du plasmide pGEM-luc du plasmide pGEX-4T-1 dans le quel on veut cloner le gène de la luciférase en aval du gène de la glutathion-S-transférase (GST)
Carte du plasmide pGEX-4T-1
Enzymes de restriction possibles⚓
Pour visualiser les 2 plasmides en même temps...
Choix des enzymes de restriction
Choix de l'enzyme⚓
On a choisi de digérer avec l'enzyme BamHI pour le site en amont du gène luc, mais pour le site en aval, on hésite entre SalI et XhoI.
On va donc vérifier si les conditions d'activité de ces enzymes sont compatibles avec celles de BamHI afin de réaliser directement la double digestion.
Les activités des enzymes de restriction dans les différents tampons Promega sont présentées dans ce document.
Choix du tampon optimal pour chaque enzyme
Dilemme
Solutions ?
Complément :
Vous pouvez aussi rechercher les meilleures conditions avec l'outil dédié de Promega.
Choix définitif du couple d'enzymes
Prix des enzymes de restriction
Les prix des différentes enzymes de restriction sont les suivants (Promega 2023) :
BamHI = 15€ les 2500 U
SalI = 103€ les 2000 U
XhoI = 52€ les 3000 U